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實(shí)驗(yàn)室新手指南之PCR儀
發(fā)布日期:2017-12-20 瀏覽次數(shù):1750
操作步驟
- 開機(jī):打開開關(guān),視窗上顯示“SELF TEST”,顯示 10 秒中后,顯示 RUN-ENTER 菜單:準(zhǔn)備執(zhí)行程序。
- 放入樣本管,關(guān)緊蓋子。
程序輸入與選擇
- 如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序,則直接按《Proceed》,用箭頭鍵選擇已儲存的程序,按《Proceed》,則屏幕顯示:按《Proceed》選擇 ENABLE,則開始執(zhí)行程序。
- 輸入新的程序:在 RUN-ENTER 菜單上用箭頭鍵選擇 ENTER PROGRAM,按《Proceed》選擇 NEW,命名新的程序,zui多 8 個字母,輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字);輸入程序步驟:名字輸入后,顯示,按《Proceed》則可以輸入溫度(0~100℃),按《Proceed》確認(rèn)后,則可以輸入孵育時間,用《Select》鍵移動光標(biāo),輸入數(shù)字,完成后按《Proceed》確認(rèn),跳到下一步,輸入方式同上;選擇 GOTO,輸入循環(huán)步驟時鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)zui多可達(dá) 9999次)(為實(shí)際循環(huán)數(shù)-1)。選擇 option,顯示:再選擇 increment,按《Proceed》確認(rèn),輸入初始的溫度,確認(rèn)后輸入時間,按《Proceed》確認(rèn),然后輸入每個循環(huán)增加或減少的溫度,增加用正值,減少用負(fù)值(-0.1℃~6℃),按《Proceed》確認(rèn)。選擇 extend,按《Proceed》確認(rèn),輸入每個循環(huán)增加或減少的時間(-60~60 秒),按《Proceed》確認(rèn);選擇 slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1~1.5℃)按《Proceed》確認(rèn),然后輸入加熱或致冷的速度,按《Proceed》確認(rèn);選擇 End,輸入結(jié)束步驟。
- 輸入完成的程序后,到 RUN-ENTER 菜單,選擇新程序,開始運(yùn)行。
- 其它:用《pause》可以暫停一個運(yùn)行的程序,再按一次繼續(xù)程序;用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。
- 編輯程序:可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值,輸入新的值后按《Proceed》確認(rèn)。對于未輸完的程序,要先輸入 END,按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。刪除已經(jīng)儲存的程序:從 RUN-ENTER 菜單中選擇 RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇 DELET,用《Select》選擇刪除。查看程序的步驟:在主菜單上選擇 LIST,按《Proceed》,用《Select》將選擇名稱,再按《Proceed》,顯示程序的*步,用《Select》鍵向前、向后翻頁查看,此時不能改變程序的值。
- 編輯已有的程序:從 RUN-ENTER 菜 單 中 選 擇 RUN-PROGRAM , 按《Proceed》,顯示主菜單,選擇 EDIT,按《Proceed》確認(rèn),用《Select》鍵選擇要編輯的程序,按《Proceed》顯示程序的*步。用《Select》鍵將光標(biāo)移到要改變的溫度或循環(huán)的值上,鍵入新值,按《Proceed》確認(rèn),按《Cancel》刪除鍵入的值,出現(xiàn)空格,鍵入新值后確認(rèn)。注:一旦值被改變或刪除,原來的值不能恢復(fù),必須重新鍵入。編輯時間值:必須重新鍵入小時、分鐘、秒,按《Proceed》。
PCR 體系設(shè)置
- 預(yù)變性:可用 94~95℃,2~10min,一般用 5min。
- 變性:一般用 94℃,30s~2min,一般 45s~1min。
- 退火:溫度自定,30s~2min。
- 延伸:70~75℃,一般 72℃,對于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb 加 1min。
- 循環(huán)數(shù):一般 25~35 個循環(huán)。
- zui終延伸:72℃,5~15min。
- 保存:10℃,時間設(shè)為 0。
- END。
PCR 儀使用中的一些小技巧
- 仔細(xì)閱讀儀器使用說明書,這樣可以充分發(fā)揮儀器的性能并避免發(fā)生錯誤。
- 程序設(shè)計完成后,一定要仔細(xì)檢查,以免出錯造成損失。
- 常用的程序調(diào)用以前使用過的正確程序文件;樣品量較小時,在樣品槽的兩邊各加上兩排 8 聯(lián)管,這樣可使熱蓋平整,加熱效果好,有利于效果的穩(wěn)定性。
- 在進(jìn)行各種試劑加樣時,相同的試劑要一起加后再分裝,要用同一只吸液器及同一個槍頭。
- 加樣完成后,用酶聯(lián)板離心轉(zhuǎn)頭將管離心一下,使反應(yīng)液到管底,因?yàn)榉磻?yīng)液在管壁或管蓋上時,會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
PCR 儀的清洗
- 樣品池的清洗:先打開蓋子,然后用 95%乙醇或 10%清洗液浸泡樣品池 5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開 PCR 儀,設(shè)定保持溫度為 50℃ 的 PCR 程序并使之運(yùn)行,讓殘余液體揮發(fā)去除。一般 5~10min 即可。
- 熱蓋的清洗:對于熒光定量 PCR 儀,當(dāng)有熒光污染出現(xiàn),而且這一污染并非來自樣品池時,或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔干凈,無污物阻擋光路。
- 儀器外表面的清洗:清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對 PCR 儀的外表面進(jìn)行清洗。
- 更換保險絲:先將 PCR 儀關(guān)機(jī),拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險盒,換上備用的保險絲,觀察是否恢復(fù)正常。
PCR 儀的維護(hù)
- PCR 儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
- PCR 反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的,當(dāng)檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于 1~2℃時,可以運(yùn)用溫度修正法糾正 PCR 實(shí)際反應(yīng)溫度差。
- PCR 反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當(dāng) PCR 儀的降溫過程超過 60s,就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對風(fēng)冷制冷的 PCR 儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
- 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件,必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。??
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